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动物医学论文 鹿茸对小鼠S180肉瘤和H22荷瘤的抑制作用研究

2019-03-11 15:57:27来源:组稿人论文网作者:婷婷

  摘要:为了探讨鹿茸对小鼠肿瘤的抑制作用,利用S180肉瘤和H22荷瘤瘤株建立小鼠肿瘤模型,并将小鼠随机分为空白组、模型组、鹿茸大剂量组、鹿茸中剂量组、鹿茸小剂量组、环磷酰胺(CTX)组,每组10只。其中空白对照组和模型组小鼠每天以生理盐水灌胃,CTX对照组和鹿茸(大、中、小剂量)灌胃组则灌胃相应药物,以观察实验各组的抑瘤效果和脾、胸腺指数。结果显示,鹿茸可以提高小鼠的抑瘤率,其抑制效果与剂量成正比,并可以从器官水平上增强小鼠的免疫力,从而间接达到抗肿瘤效果。

  关键词:鹿茸;S180瘤株;H22瘤株;肿瘤

  前言

  根据中国药典2010版标注可知鹿茸是梅花鹿(Cervus nippon Temminck)或马鹿(Cervuseiaphus Linnaeus)雄鹿的未成熟骨化而带有茸毛的幼角。前者常被称为“花鹿茸”或“黄毛茸”,后者被称为“马鹿茸”或“青毛茸”。鹿茸是区别与其它动物,生长在梅花鹿或马鹿额上的一种特殊的骨块组织,含血液,未完全硬化的骨块。雄鹿1岁多开始第一次长角,春天生长出带有茸毛的未完全成熟的鹿茸,秋天雄鹿鹿茸上的茸毛开始脱落,鹿茸骨化成角。之后每年早春鹿角开始脱落,重新开始长茸换新角,增生一叉,至生四叉。眉叉斜向前伸,与主干成一钝角,第二枝不明显,主干在其末端再分两小枝。

  研究发现鹿茸可以再生是由于鹿茸含有干细胞,这种细胞被称为鹿茸干细胞,也被称为PP/AP细胞。

  我国主要把鹿茸用作为滋补的中药。它的历史源远流长。据文献报告可知历史已超过两千年。据《神农本草经》记载“鹿茸味甘温,主漏下恶血,寒热,惊痫,益气强志,生齿不老”。据《本草纲目》记载,鹿茸主治“身体虚弱,眼黑头昏,阳痿,小便频数,腰膝疼痛,妇女白带,阴虚腰痛,不能反侧”。梅花鹿为药用鹿茸的主要来源,但是由于野生鹿的生存状况恶化甚至即将灭绝,并结合人们生活水平的不断提高,畜牧业的科学技术正在不断发展的需求,鹿茸的生产来源也不再局限于野生的梅花鹿,现在人工养殖的鹿,如马鹿、麋鹿、驯鹿和其他茸用鹿种,但仍属于梅花鹿的鹿茸作用最好。大量研究表明鹿茸具有保护心脑血管系统、增强机体免疫力、抗氧化性、抗衰老性、抗疲劳性、增强神经中枢系统、修复创口、抗肿瘤和改善高脂血、高血压等多种作用。鹿茸不仅广泛应用于中国,在日韩,欧美等大部分国家也备受青睐。

  对于鹿茸的研究于19世纪上半叶开始,国内外许多科学家已经发现鹿茸中的很多化学成分。由于取样的鹿茸产地不同,地点不同,提取方法不同,测定方法研究结果也不尽相同。宏观来看,鹿茸组成由水、蛋白质、糖、脂类、维生素、矿物质、酶等碳水化合物。从鹿茸中可以提取出戊糖、己糖(葡萄糖、鼠李糖、岩藻糖、半乳糖)、己糖胺(氨基葡萄糖、半乳糖胺)、中性糖和多糖(酸性粘多糖、硫酸软骨素、硫酸角质素等)。脂类包括脂肪酸(棕榈酸、硬脂酸、亚麻酸、亚油酸、油酸、花生四烯酸等)、磷脂、糖脂(神经节苷)、激素、前列腺素等。维生素A,维生素B1,维生素B2,维生素D,维生素E等一些矿物包括磷、钙、钠、钾、镁、硫和其他基本元素,如铁、锰、锌、铜、硒等基本微量元素和其他元素,多达26种。已发现酶(磷酸酶、乳酸脱氢酶、肌酸激酶葡萄糖6 -磷酸脱氢酶、葡萄糖磷酸异构酶、曲霉氨基转移酶、丙氨酸氨基转移酶、GGTP(谷氨酰基转肽酶)、E胆碱酯酶、超氧化物歧化酶(sod)等。此外,在黄嘌呤和尿嘧啶的基础上有多胺,主要是沙丙胺、精胺和精胺。

  目前,对鹿茸的研究主要集中在中国、韩国、日本、新西兰、俄罗斯等发达国家。许多国家刚刚开始。在中国,黑龙江省有丰富的鹿茸资源,是本课题研究与发展的便利条件。鹿茸的组成是复杂的,它具有许多有益于人体健康的生理功能。在鹿茸提取物中,乙醇提取物具有最高的活性,具有显著的免疫增强效果。新的研究表明它具有抗肿瘤作用,但它仍然不知道什么成分有效。鹿茸乙醇提取物的主要成分是蛋白质和磷脂,鹿茸中两种成分的比例较大,具有一定的研究价值。这就是研究的切入点。以鹿茸为原料,采用超声波法提取鹿茸的磷脂和可溶性蛋白,通过单因素和正交设计获得提取工艺的优化试验。和可溶性蛋白质,卵磷脂和鹿茸乙醇提取物(由70%的乙醇提取)应用于四氧嘧啶诱导的糖尿病小鼠研究抗肿瘤和免疫功能,较低的环磷酰胺造成小鼠免疫功能实验研究免疫活动的差异,研究不同提取物的抗肿瘤免疫调节的影响。研究鹿茸提取物对多种生理指标的影响,寻找有效的抗肿瘤成分,增强免疫力,广泛应用于鹿茸的科学基础,以期更好地发挥鹿茸保健功能。

  1 材料

  1.1 试剂和药品

  哈尔滨肿瘤医院购买S180瘤株、H22瘤株;实验室自制梅花鹿茸提取物;从山西普德药业有限公司购买注射用环磷酰胺(CTX)。

  1.2 实验动物及分组

  将昆明种的雄性小鼠,体重18-22g,随机分为以下几组:(1)正常空白对照组;(2)模型组;(3)CTX对照组;(4)鹿茸灌胃组。其中鹿茸灌胃组又分大、中、小3个剂量组,每组有10只实验小鼠。最后将模型组、CTX对照组和鹿茸灌胃组均分为S180组和H22组。

  1.3 肿瘤模型造模方法

  1.3.1 小鼠H22荷瘤模型的建立

  除空白对照组外,H22组的小鼠腹水体积为2ml,用浓度为0.9%的氯化钠溶液调至2×107个/ml,将0.2ml的瘤细胞悬液接种在小鼠右前肢腋下皮下。

  1.3.2 小鼠S180肉瘤模型的建立

  除空白对照组外,S180小鼠腹水,加浓度为0.9%的氯化钠溶液调至1×108个/ml,将0.2ml的瘤细胞悬液l接种于小鼠右前肢腋下皮下。

  1.4 给药剂量与方法

  建模第一天开始给药。鹿茸组:大、中、小剂量鹿茸分别为:2.0、1.0、0.5 g/kg。CTX对照组:将0.05 g/ kg注入腹腔内,每日注射0.2 ml。模型组:每日用0.4ml生理盐水灌胃。空白对照组:每日用0.4ml生理盐水灌胃。实验第8天处死小鼠,剥去肿瘤组织并进行称重,计算肿瘤率。取脾、胸腺,计算脾、胸腺指数[3]。

  1.5 统计学方法

  本实验采用SPSS16.0统计分析软件对实验数据进行分析。用均值或负标准差表示结果,用单因素方差分析整体差异。

  2 结果

  2.1 S180和H22肿瘤小鼠的一般状态观察

  在小鼠接种S180和H22后的第二天,在腋窝接种部位观察到米粒大小的肿瘤,形状不规则。对照组的小鼠比其他组稍差,抑郁,食欲不振,体重减轻,毛色暗淡无光。在CTX组中,小鼠的精神状态也有所下降,摄入略有减少,情况比模型组较好。鹿茸组处于良好状态,精神状态,饮食状况,发色均正常,无明显不良反应。

  2.2鹿茸提取物对S180和H22肿瘤小鼠瘤重、抑瘤率的影响

  在第8天,小鼠被处死,摘取肿瘤并称量瘤重,计算肿瘤率。结果如表1所示。抑制率(%)=(模型组平均瘤重-药物组平均瘤重)/模型组平均瘤重×100%。

  从表1可以看出,与模型组相比,鹿茸组大、中、小剂量的S180肉瘤和H22荷瘤细胞的生长均产生抑制作用,随着剂量的增加,抑制作用也逐渐增强,抑瘤率最高可达46.39%和41.39%,但与环磷酰胺相比效果稍差。

  表1 鹿茸对S180肉瘤和H22荷瘤小鼠瘤重和抑瘤率的影响(x±s,n=10)

  分组剂量(g/kg)瘤重(g)抑瘤率(%)S180H22S180H22模型组1.565±0.421.220±0.28——CTX对照组0.050.775±0.30**0.632±0.21**50.4848.20鹿茸小剂量组0.51.367±0.241.005±0.23*12.6517.62鹿茸中剂量组1.01.028±0.28**0.885±0.19**34.3127.46鹿茸大剂量组2.00.839±0.32**0.715±0.33**46.3941.39注:与模型组比较,﹡表示差异显著(P﹤0.05),﹡﹡表示差异极显著(P﹤0.01)。

  2.3 鹿茸提取物对S180和H22荷瘤小鼠脾、胸腺指数的影响

  在第8天,取出胸腺和脾脏,用滤纸吸干胸腺和脾脏的血污,然后称重,计算脾和胸腺指数。结果如表2所示。脾指数(mg / g)=脾脏质量/小鼠体质量,胸腺指数(mg / g)=胸腺质量/小鼠体质量。从表2可见,鹿茸的大,中剂量组能显著提高S180肉瘤和H22荷瘤两个小鼠脾脏和胸腺指数(P﹤0.01),说明鹿茸可以提高S180肉瘤和H22荷瘤小鼠的免疫力。

  表2 鹿茸对S180肉瘤和H22荷瘤小鼠胸腺指数、脾指数的影响(x±s,n=10)

  分组剂量(g/kg)胸腺指数(mg/g)脾指数(mg/g)S180H22S180H22空白对照组2.035±0.4312.035±0.4314.345±1.0174.345±1.017模型组1.246±0.3551.311±0.2945.372±1.1365.873±1.085CTX对照组0.051.425±0.5561.489±0.3116.025±0.914*6.788±1.202*鹿茸小剂量组0.51.482±0.4341.501±0.2186.373±0.882**6.088±1.034鹿茸中剂量组1.01.827±0.475**1.793±0.305**8.013±1.022**7.812±0.916**鹿茸大剂量组2.01.991±0.398**2.001±0.269**8.874±1.249**8.219±0.873**注:与模型组比较,﹡表示差异显著(P﹤0.05),﹡﹡表示差异极显著(P﹤0.01)。

  3 讨论

  近年来,肿瘤已成为十大疾病之一,抗肿瘤药物研究已成为热点之一。在历史上鹿茸一直作为传统医学的重要药材,具有广泛的药理作用,如调节心血管功能、壮阳作用、性激素样作用、促进创面愈合、抗衰老作用,但鹿茸尚不确定是否具有一定效果。本研究结果表明,鹿茸的大、中、小剂量组对S180肉瘤和H22荷瘤细胞具有一定生长抑制作用,除了鹿茸小剂量的肿瘤抑制效果不明显,其他两个剂量组能显著抑制(P﹤0.01),并且抑制效果随着剂量的增加而增加,抑瘤率高达46.39%和41.39%,符合SBHL和白头翁中活性成分的作用。尽管其抑瘤率小于CTX,但结合小鼠的状态可以看到,鹿茸组的小鼠生长状况良好,没有明显的不良反应。而CTX组小鼠出现毛发稀疏,食欲不振,精神萎靡等现象。鹿茸在改善肿瘤小鼠体质状况和减少不良反应有更大的优势。

  机体的免疫功能在恶性肿瘤的发展中起着重要的作用。免疫功能最基本、最常规的指标是脾脏和胸腺指数。本研究发现,鹿茸大、中、小剂量可在一定程度上改善S180、H22肿瘤小鼠脾脏和胸腺指数,这与栀子油和玉屏风散对S180肿瘤小鼠的影响相同。鹿茸可以显著提高小鼠脾脏和胸腺指数(P﹤0.01),而环磷酰胺在脾脏和胸腺指数上没有明显变化,表明鹿茸的效果优于环磷酰胺。进一步说明,鹿茸对抑制肿瘤生长的作用虽然略低于环磷酰胺,但它能从器官的水平上增强小鼠的免疫功能,从而提高机体的整体抗病能力,间接达到抗肿瘤作用。

  单核吞噬细胞在机体非特异性免疫中起着不可替代的作用。该细胞系统主要包括未成熟的单核细胞、单核细胞和巨噬细胞,由骨髓干细胞分化发育,具有吞噬细胞和抗原表达功能。巨噬细胞的作用最为重要。巨噬细胞从单核细胞转化为血液中的组织,广泛应用于各种器官和组织中。巨噬细胞可以吞噬外来入侵者,也可释放酸性磷酸酶来分解致病菌,也可由附着在其上的溶菌酶分解病原体或杀死溶酶体。因此,这些酶的活性可以用来测定巨噬细胞的活性。本实验采用碳廓清试验来研究脾脏和肝中巨噬细胞外源性颗粒和吞噬活性的强弱。观察血清溶菌酶含量、酸性磷酸酶活性及异物吞噬作用。在肝脏组织中酸性磷酸酶活性决定杀灭细菌和处理抗原能力。此外,通过对重要免疫器官指数的变化的相关研究,来看器官本身的重量变化,进一步反映免疫细胞数量的变化,以此来测量机体的免疫功能。

  通过以上实验结果,不难看出,不同剂量的鹿茸提取物在不同程度的单核巨噬细胞吞噬指数中增加免疫抑制小鼠,以增强各种相关的酶活性,从而使免疫细胞活化;从数量上看,提取物对免疫相关器官的影响也反映在增强免疫细胞增殖上。鹿茸提取物对免疫抑制小鼠有良好的免疫调节作用。

  4 结论

  鹿茸能增强肿瘤小鼠的免疫功能,抑制肿瘤生长,提高免疫力,具有一定的抗肿瘤作用。

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