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动物医学 胆舒胶囊对卵巢早衰豚鼠HRT治疗后胆囊疾病的预防

2019-05-06 10:00:08来源:组稿人论文网作者:婷婷

  摘要:【目的】察看胆舒胶囊对卵巢早衰豚鼠激素补充疗法 (HRT) 治疗后胆汁分泌程度的影响, 讨论其对HRT治疗后胆道疾病发作的预防作用。【办法】取动情周期稳定的性成熟雌性豚鼠30只随机分为4组:空白对照组 (N=6) , 卵巢早衰组 (N=8) , HRT组 (N=8) , HRT+胆舒胶囊组 (N=8) 。采用环磷酰胺 (CTX) 腹腔注射法复制卵巢早衰豚鼠模型。HRT组给予补佳乐 (剂量为0.3 mg·kg-1·d-1) 灌胃, HRT+胆舒胶囊组给予补佳乐 (剂量为0.3 mg·kg-1·d-1) 、胆舒胶囊 (剂量为0. 45 g·kg-1·d-1) 灌胃, 造模胜利后, 空白对照组、卵巢早衰组给予等量生理盐水灌胃, 连续给药2个性周期, 即32 d。给药完毕后, 采用循环酶法测定胆汁中总胆固醇、总胆汁酸的含量。【结果】与空白对照组比拟, HRT组16、32 d总胆汁酸含量降落, 总胆固醇含量上升 (均P <0.05) ;HRT+胆舒胶囊组32 d总胆汁酸含量上升, 16、32 d总胆固醇含量降落 (均P <0.05) 。【结论】胆舒胶囊可改善HRT所致卵巢早衰豚鼠胆汁成分含量的改动。用药周期越长, 预防效果越明显。

  关键词:胆舒胶囊; 激素补充疗法; 卵巢早衰; 总胆汁酸; 总胆固醇; 疾病模型, 动物; 豚鼠;

  随着人口老龄化的加剧, 围绝经期女性的人口数目逐年在增加, 我国表现特别突出。我国目前共有1.67亿绝经女性人口, 每年迈入50岁绝经年龄的女性达近1千万, 据数据统计揣测, 到2030年可能到达2.8亿。另外, 除自然绝经外, 随着生活节拍的加快与紊乱, 在环境污染、饮食污染、流产解禁等不良影响的作用下, 卵巢早衰 (premature ovarian failure, POF) 女性人数亦逐年增加, 卵巢功用的衰退亦呈现逐年提早趋向。随着人们对该疾病认识的进步, 激素补充疗法 (hormone replacement therapy, HRT) 开端逐步运用;但研讨标明, 雌激素能够改动胆汁各成分的含量, 使胆固醇含量过高, 胆汁酸含量过低, 易于构成胆固醇结晶, 从而招致胆囊炎以及促进胆囊结石的构成, 胆囊结石又进一步招致胆囊炎重复发作。目前, 鲜少有对HRT所致胆道相关性疾病起预防作用的药物的研讨, 且多是在疾病构成之后再治疗, 因而找到一种运用便当、效果较好、反作用较低的药物来促进胆汁排泄、拮抗HRT对胆汁成分的改动, 从而预防胆道疾病的发作, 是当前临床中面临的问题之一, 也是本研讨的动身点。本研讨以卵巢早衰豚鼠模型为研讨对象, 给予HRT的同时给予胆舒胶囊治疗, 察看胆汁成分的含质变化, 以讨论胆舒胶囊预防HRT致卵巢早衰豚鼠模型发作胆囊疾病的风险。现将研讨结果报道如下。

  1 资料与办法

  1.1 实验动物

  挑选出性成熟且性周期稳定的6周龄雌性豚鼠30只, SPF级, 体质量250~300 g, 购自广东省实验动物中心, 动物质量合格证号:44007200045589。饲养在深圳市康泰生物制品股份有限公司SPF级动物房, 饲养条件:豚鼠每笼4只, 饲养在恒温 (22±2) ℃、恒湿 (45±5) %、人工光照明暗各12 h的饲养室内, 给予规范饲料和自来水, 自在取食饮水。

  1.2 药物及配制

  胆舒胶囊, 0.45 g/粒, 四川济生堂药业有限公司消费, 消费批号为170444;临床用药量:每次2粒, 每日3次。依据人与动物剂量换算表, 折算其豚鼠等效剂量为0.45 g·kg-1·d-1, 临用前用生理盐水配成90 g/L溶液, 低温保管备用[5]。补佳乐 (戊酸雌二醇片, Progynova) , 每片1mg, DELPHARM Lille S.A.S.企业消费, 消费批号为352A;临床用药量:每次1片, 每天1次。依据人与动物计量换算表, 折算其豚鼠等效剂量为0.3mg·kg-1·d-1, 临用前用生理盐水配成200 mg/L溶液, 低温保管备用。环磷酰胺 (CTX) , 每片50 mg, 通化茂祥制药有限公司消费, 消费批号为170501;临床用药量2~4 mg/kg, 连用10~14 d, 休息1周反复。

  1.3 试剂与仪器

  甲苯胺蓝染色剂 (1%, 磷酸盐法) 北京索莱宝科技有限公司消费;总胆固醇 (TC) 测定试剂盒, 绍兴市创烨生物科技有限公司消费, 批号:20180110;总胆汁酸 (TBA) 测定试剂盒 (循环酶法) , 由长春汇力生物技术有限公司消费, 批号:2017008。CKX41显微镜 (日本Olympus公司) ;Epoch酶标仪 (美国Bio-Tek公司) 。

  1.4 动物分组

  取动情周期稳定的性成熟雌性豚鼠30只, 顺应性饲养1周后, 随机分为4组:空白对照组 (N=6) , 卵巢早衰组 (N=8) , HRT组 (N=8) , HRT+胆舒胶囊组 (N=8) 。

  1.5 卵巢早衰豚鼠模型的复制

  卵巢早衰组、HRT组、HRT+胆舒胶囊组等3组豚鼠均复制卵巢早衰模型。办法:CTX首日负荷剂量为50 mg·kg-1·d-1, 以后连续以8 mg·kg-1·d-1的维持剂量腹腔注射14 d[6]。每天清晨8∶00逐只停止阴道涂片镜检, 用清洁枯燥的小头棉签沾取生理盐水, 一手抓豚鼠, 另一手持棉签悄悄在豚鼠阴道上1/3段侧壁旋转3圈以获得阴道分泌物, 在玻片作平均薄涂片, 用体积分数95%的酒精固定枯燥后用甲苯胺蓝染色, 盖上盖玻片, 可即时停止镜检。当在显微镜下察看到阴道上皮细胞连续7 d处于动情间期, 且造模豚鼠乳腺中止发育, 外阴枯燥萎缩, 随同心情低落或躁动, 则可确认卵巢早衰模型树立胜利, 以证明每组契合实验请求。阴道零落细胞检查原理:阴道上皮细胞随体内性激素程度变化的影响, 而具有周期性的改动, 当体内雌激素程度低时, 即表现为动情间期;卵巢早衰后雌激素程度极度低落时, 显微镜下可见豚鼠阴道零落细胞涂片将不再表现为周期性变化, 而停留在动情间期的以白细胞为主的特征, 此办法直观、烦琐、无创, 可定性判别。

  1.6 给药

  造模胜利后, 空白对照组、卵巢早衰组给予一次性等量生理盐水灌胃;HRT组给予补佳乐 (剂量为0.3 mg·kg-1·d-1) 灌胃;HRT+胆舒胶囊组给予补佳乐 (剂量为0.3 mg·kg-1·d-1) 、胆舒胶囊 (剂量为0.45 g·kg-1·d-1) 灌胃, 连续给药2个性周期, 即32 d。

  1.7 胆汁中总胆固醇、总胆汁酸的测定

  给药后的第16天 (第1个性周期) 及第32天 (第2个性周期) 各组分别随机抽取数量1/2的豚鼠;在豚鼠禁食12~16 h的前提下, 用100 g/L水合氯醛 (每100g体质量0.35 mL) 给予豚鼠腹腔注射麻醉后[9], 使其腹部朝上, 背部固定于鼠板上, 找到剑突, 沿腹中线切开约2 cm, 翻开腹腔, 找到胆囊, 用1 mL注射器汲取胆汁, 密封保管在-20℃的冰箱中, 并采用循环酶法测定胆汁中总胆固醇、总胆汁酸的含量。

  1.8 统计办法

  采用SPPS 21.0软件停止数据剖析。计量数据以均数±规范差 (±s) 表示, 多组比拟采用单要素方差剖析。以P<0.05为差别有统计学意义。

  2 结果

  2.1 正常豚鼠动情周期阴道零落细胞表现

  造模前挑选出性周期稳定的豚鼠作为实验动物, 每日上午8∶00用沾有生理盐水的棉签刮取豚鼠阴道零落细胞, 察看动情周期正常的豚鼠的阴道零落细胞周期变化, 如图1所示。动情前期豚鼠阴道零落细胞涂片, 以有核上皮细胞为主 (如图1-a“↑”所示) , 偶有角化上皮细胞及白细胞, 见图1-a;动情期豚鼠阴道零落细胞涂片, 以角化上皮细胞为主 (如图1-b“△”所示) , 偶有有核上皮细胞及白细胞, 见图1-b;动情后期豚鼠阴道零落细胞涂片, 白细胞 (如图1-c“°”所示) 中混有局部有核上皮细胞及角化上皮细胞, 见图1-c;动情后期豚鼠阴道零落细胞涂片, 以白细胞为主, 见图1-d。

  图1 正常豚鼠动情周期阴道零落细胞涂片 (甲苯胺蓝染色, ×100) Figure 1 The features of cervical cast-off cells in normal guinea pigs in estrous cycle (by toluidine blue staining, ×100)

  2.2 各组豚鼠胆汁中总胆固醇、总胆汁酸含质变化

  表1结果显现:与空白对照组比拟, HRT组16、32 d总胆固醇含量均升高 (P<0.05) ;与HRT组比拟, HRT+胆舒胶囊组16、32 d总胆固醇含量均相应降落 (P<0.05) 。

  表1 各组不同时间总胆固醇含质变化Table 1 Comparison of the cholesterol contents in various groups at different-time points[±s, c总胆固醇/ (μmol·L-1) ]

  表2结果显现:与空白对照组比拟, HRT组16、32 d总胆汁酸含量均降落 (P<0.05) ;与HRT组比拟, HRT+胆舒胶囊组16、32 d总胆汁酸含量均相应升高, 且32 d总胆汁酸含量的升高差别有统计学意义 (P<0.05) 。

  表3结果显现:与空白对照组比拟, HRT组32 d总胆固醇/总胆汁酸比值降落 (P<0.05) ;与HRT组比拟, HRT+胆舒胶囊组32 d总胆固醇/总胆汁酸比值升高 (P<0.05) 。

  提示HRT可使卵巢早衰豚鼠胆汁中总胆固醇含量升高, 总胆汁酸含量降低, 发作胆结石的可能性大, 而胆舒胶囊可降低应用HRT所招致的总胆固醇含量升高, 进步降低的总胆汁酸含量。

  表2 各组不同时间总胆汁酸含质变化Table 2 Comparison of the bile acid contents in various groups at different time points[±s, c总胆汁酸/ (μmol·L-1) ]

  表3 各组不同时间总胆汁酸/总胆固醇比值Table 3 Comparison of the ratio of bile acid to cholesterol in various groups at different-time points[±s, p总胆汁酸/总胆固醇/%]

  3 讨论

  激素补充疗法 (HRT) 已逐步普遍用于临床治疗卵巢早衰及围绝经期综合征, 但存在的不良反响使得其在临床运用中遭到很多限制, 其中临床常用药补佳乐阐明书就明白表示其不良反响之一即是某些妇女在运用期间易发作胆囊疾病。本研讨旨在找出一种药物来降低HRT期间发作胆囊疾病的风险度, 同时请求该药没有或简直无不良反响。本课题组经过查询文献研讨发现, 胆舒胶囊具有很好的降低胆汁中胆固醇含量、抗炎镇痛以及抗病原微生物的作用, 且不良反响较少。因而, 本研讨应用卵巢早衰豚鼠模型, 给予HRT的同时给予胆舒胶囊治疗, 经过察看胆汁成分含量的变化来评价胆舒胶囊能否能降低HRT招致胆囊疾病这一不良反响的风险度。

  慢性胆囊炎在中医学上属于“胁痛”、“胆胀”等范畴, 有学者经过文献研讨总结到慢性胆囊炎是由湿热郁结、气机郁滞、胆失通降等惹起的, 治法上常用疏肝利胆、理气止痛、清化湿热, 方药上主要采用柴胡类方剂, 如小柴胡汤、大柴胡汤、四逆散、逍遥散、膈下逐瘀汤、黄连汤等, 各家经历学说不尽相同。

  胆舒胶囊是由四川济生堂药业有限公司消费的双方制剂, 从薄荷中提取薄荷素油与淀粉为辅料混合所制成, 具有疏肝利胆、清热解毒、解痉止痛排石等作用, 临床上主要将其用于慢性胆囊炎及胆石症等的治疗。临床上适用于胆舒胶囊单独治疗的疾病有急慢性胆囊炎、慢性结石性胆囊炎、胆石症、胆囊切除术后综合征;运用胆舒胶囊的不良反响主要有消化道不良病症, 如上腹不适、嗳气、口渴、腹泻、便秘, 但上述不良反响均比拟细微, 经过停药及对症治疗即可立刻有效缓解。因而, 从众多治疗胆道疾病的药物中我们选用胆舒胶囊, 与临床常用于治疗卵巢早衰的雌激素补充药物补佳乐 (主要成分戊酸雌二醇) 一同结合治疗卵巢早衰豚鼠。模型制备采用既往研讨中常用的办法:CTX首日50 mg/kg, 以后连续每日8 mg/kg的剂量腹腔注射, 模仿出人类卵巢早衰的病理模型, 经过16、32 d两个时间察看点, 即以16 d豚鼠的一个动情周期为一个节点来察看胆汁成分中总胆汁酸、总胆固醇的含质变化。

  本研讨结果显现:治疗后, 卵巢早衰组、HRT组、HRT+胆舒胶囊组总胆汁酸含量较空白对照组有所降落, 总胆固醇含量有所上升;而HRT组总胆汁酸含量较HRT+胆舒胶囊组降落更明显, 总胆固醇含量上升更明显。提示胆舒胶囊结合HRT治疗卵巢早衰模型能够降低HRT构成胆囊结石、胆囊炎的风险。就治疗16 d与治疗32 d用药周期相比拟而言, HRT组治疗周期越长, 总胆汁酸含量降落越明显, 总胆固醇上升越明显, 而HRT+胆舒胶囊组治疗周期越长, 总胆汁酸、总胆固醇程度越接近空白对照组程度。提示在运用HRT的同时加用胆舒胶囊来预防胆结石、胆囊炎有一定的效果, 而且治疗周期越久, 越不易于胆结石的构成, 不易于患胆囊炎。此外, 经过察看卵巢早衰组总胆汁酸含量降落、总胆固醇含量上升的趋向发现, 单纯卵巢早衰豚鼠亦存在一定的胆囊炎、胆结石风险, 此考证了既往已存在的实验结果, 即绝经妇女体内雌酮高可增加患胆囊炎的风险。由于本研讨察看指标有限, 胆舒胶囊预防HRT所招致胆囊炎的详细机制还不甚明白, 有待进一步深化研讨。

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